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Beschreibung
Klinische Relevanz
Vitamin B6 umfasst Pyridoxin, Pyridoxamin und Pyridoxal sowie deren Phosphatderivate. Pyridoxal-5’-Phosphat (PLP) ist die aktive Coenzymform und an nahezu hundert enzymatischen Reaktionen beteiligt. Dazu gehören unter anderem die Synthese und der Abbau von Aminosäuren, die Verstoffwechselung von Aminosäuren zu Kohlenhydraten und der Fettsäuremetabolismus. Vitamin B6 ist außerdem bei der Weiterleitung von Neurotransmittern wie Serotonin und Dopamin erforderlich sowie bei der Biosynthese von bestimmten Porphyrinen. Der Bedarf an Vitamin B6 ist unter anderem von der Menge an konsumierten Proteinen abhängig.
Vitamin B6 kommt in vielen Nahrungsmitteln vor, so dass Mangelerscheinungen selten sind. Dennoch kann bei einseitiger Ernährung ein Mangel gemeinsam mit anderen wasserlöslichen Vitaminen auftreten. Dabei kann es zu einer Vielzahl an Symptomen kommen, wie Wachstumsstörungen, Anämien durch Störungen in der Häm-Synthese, chronische Entzündungen der Zunge oder Dermatitis. Es gibt auch viele Stoffwechselstörungen aufgrund eines Vitamin-B6-Mangels wie beispielsweise der Homocysteinämie.
Eine Überdosierung durch natürliche Nahrungsmittel ist praktisch nicht möglich und kommt daher nur bei übermäßiger Supplementierung vor. Sie führt dann zur Photosensitivität oder zu bestimmten Neuropathien. Bei Säuglingen sind auch Tachykardie und periphere Durchblutungsstörungen beschrieben.
Produktvorteile
- Bestimmung im Vollblut und Plasma/Serum möglich
- Einfache Handhabung
- Kosteneffizienz durch optimierte Kit-Zusammensetzung
Mit diesem Reagenzienkit für die HPLC wird PLP aus Vollblut einfach und sicher bestimmt. Die Probenvorbereitung beginnt mit einer effektiven Proteinfällung und der Abspaltung des proteinösen Holoenzyms. Durch anschließende Derivatisierung entsteht eine fluoreszierende PLP-Verbindung. Die chromatographische Messung erfolgt isokratisch mit Fluoreszenzdetektion.
Chromsystems bietet auch weitere Methoden mittels HPLC und UHPLC zur kombinierten Analytik von Vitamin B6 mit Vitamin B1 an.
Chromatogramm
Technische Daten
Analysenmethode
HPLC
Anzahl der Bestimmungen
100
Parameter
Vitamin B6 (PLP, Pyridoxal-5’-phosphat)
Analysendauer
< 8 min
Bestimmungsgrenzen
0,6 µg/l
Linearität
bis zu 250 µg/l
Wiederfindungsrate
86 %
Intraassay
VK < 1,3 %
Interassay
VK < 3,7 %
Probenmaterial
Vollblut
Präanalytik
Die Patientenproben gekühlt und lichtgeschützt versenden. Ihre Haltbarkeit beträgt im Dunkeln bei +2 bis +8 °C eine Woche, bei -20 °C mehrere Monate (7).
Probenvorbereitung
- 200 μl Vollblut mit 300 μl Precipitation Reagent in lichtgeschütztem Reaktionsgefäß mischen.
- Mindestens 30 s vortexen.
- 10 min bei +4 °C inkubieren, anschließend 5 min bei 16 000 x g zentrifugieren.
- 250 μl des Überstandes in ein neues lichtgeschütztes Reaktionsgefäß überführen.
- 250 μl Neutralisation Reagent und anschließend 100 μl Derivatisation Reagent (cyanidhaltig) zugeben, kurz mischen.
- 20 min inkubieren bei 60 °C (Wasserbad).
- Anschließend Probe 10 min bei +4 °C abkühlen und 2 min bei 16 000 x g zentrifugieren.
- Überstand in lichtgeschütztes Autosamplergefäß überführen.
- 25–50 μl in das HPLC-System injizieren.
Probenstabilität
Die vorbereiteten Proben sind lichtgeschützt bei Raumtemperatur 5 Tage und im Kühlschrank bei +2 bis +8 °C mindestens 7 Tage haltbar. Bei längerer Lagerung (bis zu zwei Wochen) die Proben unter -18 °C aufbewahren.
Zusätzliche Informationen
Für die HPLC-Analytik von Vitamin B6 eignet sich jedes gängige isokratische HPLC-System mit Fluoreszenz-Detektion.
Injektionsvolumen
25 - 50 µl
Flussrate
1 - 1,2 ml/min
Gradient
Isocratic
Säulentemperatur
Raumtemperatur (~25 °C)
Messwellenlänge
EX 320 nm
EM 415 nm
Hinweis
Bitte beachten Sie, dass die frei zugänglichen Informationen dieser Website, insbesondere auch der Probenvorbereitung, nicht zur Verwendung der Produkte ausreichen. Bitte lesen Sie dazu die Anweisungen und Warnhinweise auf Produkten und/oder in der Arbeitsvorschrift.
Kitkomponenten
Kalibratoren
Kontrollen
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