MassTox® Immunsuppressiva im Vollblut - LC-MS/MS

MassTox® Immunsuppressiva im Vollblut - LC-MS/MS

   
  • Cyclosporin A
  • Everolimus
  • Sirolimus
  • Tacrolimus

Bestell.-Nr.: 93000, 93000/1200
400 / 1200 Tests

Matrixeffekte werden eliminiert durch Online Probenvorbereitung mit Trap-Säulen-Technologie und deuterierte interne Standards

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Beschreibung

Klinische Relevanz

Immunsuppressiva unterdrücken die Aktivität des Immunsystems, um so Abstoßungsreaktionen nach Organtransplantationen zu verhindern. Darüber hinaus werden sie bei Autoimmunerkrankungen als Medikamente eingesetzt. Für die Therapieüberwachung nach Organtransplantationen ist das therapeutische Drug-Monitoring unverzichtbar. Neben der Mycophenolsäure sind die am häufigsten nach Transplantation eingesetzten Immunsuppressiva Cyclosporin A (INN: Ciclosporin), Tacrolimus (FK506), Sirolimus und Everolimus. Cyclosporin A und Tacrolimus unterdrücken die für die Immunantwort erforderliche Signaltransduktion durch Hemmung von Calcineurin. Es steuert z.B. die Synthese von Interleukinen in den T-Zellen bei einer Immunantwort. Dagegen sind Sirolimus und dessen Derivat Everolimus calcineurin-unabhängig und hemmen mTOR (mammalian target of rapamycin), ein für die Signalübertragung wichtiges Enzym bei der Immunantwort.

Zur quantitativen Bestimmung dieser Immunsuppressiva sollte nur die LC-MS/MS eingesetzt werden, da immunologische Verfahren sich in Selektivität und Spezifität mitunter deutlich unterscheiden und teilweise auch unwirksame Metaboliten erfassen. Außerdem spielt bei der Analytik dieser Immunsuppressiva die Kompensation von Matrixeffekten eine entscheidende Rolle für die diagnostische Bestimmung aus Vollblut, einer komplexen Matrix. Zur genauen und sicheren Quantifizierung ist daher eine deutliche Reduzierung der Störungen unbedingt erforderlich.

 

Produktvorteile

  • Zuverlässige Eliminierung von Matrixeffekten
  • Hohe Selektivität und Sensitivität
  • 6PLUS1® Multilevel Calibrator Set und MassCheck® Kontrollen erhältlich

 

Die Probenvorbereitung ist auf eine einfache und effektive Proteinfällung reduziert und sorgt für eine drastische Minimierung von Matrixeffekten. Anschließend werden die Analyte online auf der Trap-Säule angereichert und störende Matrixsubstanzen abgetrennt. Über ein einfaches Säulenschaltsystem ist die Trap-Säule mit der HPLC-Säule und dem MS/MS-System verbunden. Die isotopenmarkierten internen Standards kompensieren die verbleibende Ionensuppression sehr effektiv. Daher ist die Analytik der vier Immunsuppressiva mit diesem Kit robust, präzise und reproduzierbar. Der Einsatz von 6PLUS1® Multilevel Kalibratoren aus humanem Vollblut und unsere MassCheck® Kontrollen gewährleistet eine hohe Genauigkeit der Ergebnisse.

Für eine beschleunigte Analytik und sehr hohen Probendurchsatz bieten wir Ihnen als Alternative die ONEMINUTE-Methode für die LC-MS/MS an (Best.-Nr 93900).

 

Inhalt 93000                              

Mobile Phase A, 1000 ml                     
Mobile Phase B, 1000 ml                      
Precipitation Reagent, 100 ml                 
Internal Standard Set, 1 box                
Extraction Buffer, 40 ml           
Rinsing Solution, 1000 ml          
Reaktionsgefäße (Lichtschutz), 4 x 100 Stück

 

Inhalt 93000/1200

Mobile Phase A, 3 x 1000 ml                     
Mobile Phase B, 3 x 1000 ml                      
Precipitation Reagent, 3 x 100 ml                 
Internal Standard Set, 3 x 1 box              
Extraction Buffer, 3 x 40 ml        
Rinsing Solution, 2 x 1000 ml            
Reaktionsgefäße (Lichtschutz), 12 x 100 Stück       
Analytische Säule, 1 Stück          
Trap-Säule, 2 Stück                  
6PLUS1® Multilevel  Calibrator Set Immunosuppressants, 7 x 2 ml      

Chromatogramm

Technische Daten

Analysenmethode

LC-MS/MS

Parameter

Cyclosporin A, Everolimus, Sirolimus, Tacrolimus

Analysendauer

4,5 min

Bestimmungsgrenzen

Cyclosporin A: < 5,0 µg/l
Everolimus: < 0,5 µg/l
Sirolimus: < 0,5 µg/l
Tacrolimus: < 0,5 µg/l

Linearität

Cyclosporin A: bis zu 2000 µg/l
Everolimus: bis zu 100 µg/l
Sirolimus: bis zu 100 µg/l
Tacrolimus: bis zu 100 µg/l

Probenmaterial

Vollblut

Präanalytik

Patientenproben sind bei +2 bis +8 °C bis zu 7 Tage haltbar.

Probenvorbereitung

  • 50 µl Probe/Kalibrator/Kontrolle in einem 1,5 ml Reaktionsgefäß vorlegen.
  • 25 µl rekonstituierten Internal Standard Mix zugeben.
  • 100 µl Extraction Buffer zugeben, 10 s mischen (Vortex) und 2 min bei Raumtemperatur inkubieren
  • 250 µl Precipitation Reagent zugeben, 1 min mischen (Vortex), ca. 2 min bei Raumtemperatur inkubieren
  • 5 min bei 15 000 x g  zentrifugieren
  • Den Überstand zur Analytik in das LC-MS/MS-System injizieren

Probenstabilität

bis zu 7 Tage bei +2°C bis 8°C

Injektionsvolumen

5–25 µl

Ionisation

ESI positiv

MS/MS-Modus

MRM

Hinweis

Bitte beachten Sie, dass die frei zugänglichen Informationen dieser Website, insbesondere auch der Probenvorbereitung, nicht zur Verwendung der Produkte ausreichen. Bitte lesen Sie dazu die Anweisungen und Warnhinweise auf Produkten und/oder in der Arbeitsvorschrift.

Kitkomponenten

Einzeln lieferbare Komponenten

Mobile Phase A


Best.-Nr.: 93001

Mobile Phase B


Best.-Nr.: 93002

Precipitation Reagent


Best.-Nr.: 93003

Extraction Buffer


Best.-Nr.: 93005

Rinsing Solution


Best.-Nr.: 93009

Internal Standard Set


Best.-Nr.: 93046

Reaktionsgefäße


Best.-Nr.: 33005

Kalibratoren

Einzeln lieferbare Kalibratoren

Kontrollen