55000 Amino Acids and Acylcarnitines from Dried Blood

MassChrom® Aminosäuren und Acylcarnitine aus Trockenblut - LC-MS/MS

Best.-Nr.: 55000
960 Tests
  • Acylcarnitine & freies Carnitin
  • Aminosäuren

Mit Succinylaceton Upgrade
Beinhaltet alle benötigten Reagenzien und isotopenmarkierte Standards
Trockenblut-Kontrollen auf Filterpapier verfügbar
Multiple Diagnostik in einem Lauf

Beschreibung

Klinische Relevanz

Ziel des Neugeborenen-Screenings (NBS) ist das frühzeitige Erkennen angeborener Stoffwechselstörungen, bevor diese zu Schäden am Organismus führen. Darunter fallen Störungen des Aminosäurestoffwechsels wie der Phenylketonurie (PKU) und der Ahornsirup-Krankheit (MSUD), Störungen des Fettsäurestoffwechsels sowie Organoazidurien (Isovalerianazidämie). Werden diese Krankheiten nicht diagnostiziert, so können diese Stoffwechselstörungen bereits in den ersten Lebenstagen zu schweren irreversiblen Schäden bei Neugeborenen führen.

Die Massenspektrometrie ist dabei die Methode der Wahl: sie erlaubt die Erfassung eines breiten Spektrums an Stoffwechseldefekten in einem einzigen Lauf. Durch die hohe Selektivität der LC-MS/MS kann auch auf eine HPLC-Säule verzichtet werden. Damit ist eine sehr präzise Quantifizierung in einer sehr kurzen Analysenzeit von unter 2 Minuten möglich.

 

Produktvorteile

  • Multiple Diagnostik in einem Lauf
  • Hohe Selektivität und Sensitivität durch MS/MS-Detektion
  • Trockenblut-Kontrollen auf Filterpapier
  • Succinylaceton-Upgrade erhältlich

 

Dieser Chromsystems-Kit erlaubt die sehr schnelle semiquantitative Bestimmung von Aminosäuren, Acylcarnitinen und Succinylaceton (SUAC) in getrockneten Blutproben (DBS, dried blood spot) im Rahmen des Neugeborenen-Screenings mittels Tandem-Massenspektrometrie. Die Probenvorbereitung kann in unter 2 Stunden durchgeführt werden und basiert auf einer effektiven Extraktion der Analyte aus der Filterkarte mit anschließender Derivatisierung. 27 stabile isotopenmarkierte interne Standards für die Kalibrierung und Messung gewährleisten eine reproduzierbare Quantifizierung der Analyte. Zur Analytik von Succinylaceton steht ein Upgrade Set zur Verfügung (siehe Zubehör).

Weiterhin gibt es ein Kit ohne Derivatisierung (Best.-Nr. 57000).

Chromatogramm

Technische Daten

Analysenmethode

LC-MS/MS

Anzahl der Bestimmungen

960

Parameter

Acylcarnitine & freies Carnitin, Aminosäuren

Analysendauer

< 2 min

Bestimmungsgrenzen

Aminosäuren mit SUAC: 0,5-5 μmol/l
(Acyl-)Carnitine: 0,05-0,5 μmol/l

Linearität

Aminosäuren mit SUAC: 250-2500 μmol/l
(Acyl-)Carnitine: 11-240 μmol/l

Wiederfindungsrate

Aminosäuren mit SUAC: 51-94 %; (Acyl-)Carnitine: 62-89 %

Intraassay

Aminosäuren mit SUAC: Vk = 4-10 %
(Acyl-)Carnitine: Vk = 4-20 %

Interassay

Aminosäuren mit SUAC: Vk = 5-9 %
(Acyl-)Carnitine: Vk = 8-28 %

Cutoff-Werte

Aminosäuren 22-743 µmol/l
freies Carnitin 50-60 µmol/l
Acylcarnitine 0,1-48 µmol/l
SUAC 1,16 µmol/l

Information

Massenübergänge der Analyte und internen Standards

Aminosäuren Neutral Loss Scan von 102 (m/z)
Alanin 146 > 44
Alanin-D4 150 > 48
Asparaginsäure 246 > 144
Asparaginsäure-D3 249 > 147
Glutaminsäure 260 > 158
Glutaminsäure-D5 265 > 163
Leucin 188 > 86
Leucin-D3 191 > 89
Methionin 206 > 104
Methionin-D3 209 > 107
Phenylalanin 222 > 120
Phenylalanin-D5 227 > 125
Tyrosin 238 > 136
Tyrosin-D4 242 > 140
Valin 174 > 72
Valin-D8 182 > 80
  MRM
Arginin 231>70
Arginin-D7 238 > 77
Citrullin 232 > 113
Citrullin-D2 234 > 115
Glycin 132 > 76
Glycin-13C2-15N 135 > 79
Ornithin 189 > 70
Ornithin-D6 195 > 76
Prolin 172 > 116
Prolin-D7 179 > 123
SUAC 211 > 109
SUAC-13C5 216 > 114
   
(Acyl-)carnitine Parent Ion Scan 85
Carnitin 218 > 85
Carnitin-D9 227 > 85
C2-Carnitin 260 > 85
C2-Carnitin-D3 263 > 85
C3-Carnitin 274 > 85
C3-Carnitin-D3 277  > 85
C4-Carnitin 288 > 85
C4-Carnitin-D3 291 > 85
C5-Carnitin 302 > 85
C5-Carnitin-D9 311 > 85
C5DC-Carnitin 388 > 85
C5DC-Carnitin-D6 394 > 85
C6-Carnitin 316 > 85
C6-Carnitin-D3 319 > 85
C8-Carnitin 344 > 85
C8-Carnitin-D3 347 > 85
C10-Carnitin 372 > 85
C10-Carnitin-D3 375 > 85
C12-Carnitin 400 > 85
C12-Carnitin-D3 403 > 85
C14-Carnitin 428 > 85
C14-Carnitin-D3 431 > 85
C16-Carnitin 456 > 85
C16-Carnitin-D3 459 > 85
C18-Carnitin 484 > 85
C18-Carnitin-D3 487 > 85

Flussrate

20 bis 600 µl/min

Probenmaterial

Trockenblut

Präanalytik

Probenmaterial

  • Blut aus der Ferse des Neugeborenen direkt auf eine geeignete Filterkarte geben. 4 Stunden bei Raumtemperatur trocknen.

Probenentnahmezeitpunkt

  • 48. bis 72. Lebensstunde

Probenvorbereitung

Probenvorbereitung (allgemein)

  • Trockenblut-Stanzling (Durchmesser: 3 mm) aus der Filterkarte in eine 96-Well-Platte (oder Filterplatte) ausstanzen.
  • 200 µl Internal Standard zugeben. 96-Well-Platte mit Folie verschließen und 20 min bei Raumtemperatur und 600 U/min schwenken.
  • Überstand in eine neue 96-Well-Platte überführen. Bei Verwendung einer Filterplatte Überstand durch Zentrifugation (4000 U/min, 2 Minuten) in die 96-Well-Platte überführen.
  • Bei 60 °C und 600 U/min zur Trockne eindampfen.
  • 60 µl Derivatisation Reagent zugeben, 96-Well-Platte verschließen und 15 min bei 60 °C und 600 U/min inkubieren.
  • Bei 60 °C und 600 U/ min zur Trockne eindampfen.
  • 100 µl Reconstitution Buffer zugeben, 1 min bei 600 U/min schwenken.
  • 10 µl in das LC-MS/MS-System injizieren.

Probenvorbereitung (Succinylaceton)

  • Trockenblut-Stanzling (Durchmesser: 3 mm) aus der Filterkarte in eine 96-Well-Platte (oder Filterplatte) ausstanzen.
  • 200 µl Internal Standard zugeben. 96-Well-Platte mit Folie verschließen und 20 min bei Raumtemperatur und 600 U/min schwenken.
  • Überstand in eine neue 96-Well-Platte überführen. Bei Verwendung einer Filterplatte Überstand durch Zentrifugation (4000 U/min, 2 Minuten) in die 96-Well-Platte überführen.
  • 150 µl Internal Standard Succinylacetone zum verbleibenden Blood Spot geben und 30 min bei 60 °C schwenken.
  • Überstände vereinen und bei 60 °C und 600 U/min zur Trockne eindampfen.
  • 60 µl Derivatisation Reagent zugeben, 96-Well-Platte verschließen und 15 min bei 60 °C und 600 U/min inkubieren.
  • Bei 60 °C und 600 U/ min zur Trockne eindampfen.
  • 200 µl Reconstitution Buffer zugeben, 1 min bei 600 U/min schwenken.
  • 10 µl in das LC-MS/MS-System injizieren.

Probenstabilität

Bei Raumtemperatur (+20 bis +25 °C) oder gekühlt (+2 bis +8 °C) bis zu 21 Tage. Bei längerer Lagerung sollten die Proben unter Feuchtigkeitsschutz eingefroren werden (unter -18 °C). Temperaturen über 37 °C vermeiden.

Injektionsvolumen

10 µl

Autosampler-Spüllösung

Rinsing Solution (55007)

MS/MS-Modus

Aminosäuren: Neutral Loss Scan von 102 (m/z); Acylcarnitine: Parent Ion Scan von 85 (m/z)

Zusätzliche Informationen

Es ist keine HPLC-Säule erforderlich.

Hinweis

Bitte beachten Sie, dass die frei zugänglichen Informationen dieser Website, insbesondere auch der Probenvorbereitung, nicht zur Verwendung der Produkte ausreichen. Bitte lesen Sie dazu die Anweisungen und Warnhinweise auf Produkten und/oder in der Arbeitsvorschrift.

Kitkomponenten

Kontrollen