55000 Amino Acids and Acylcarnitines from Dried Blood

MassChrom® Aminosäuren und Acylcarnitine aus Trockenblut - LC-MS/MS

Best.-Nr.: 55000
960 Tests
  • Acylcarnitine & freies Carnitin
  • Aminosäuren

Probenvorbereitung mit Derivatisierung der Analyten
Mit 96-Well-Platten

Beschreibung

Klinische Relevanz

Ziel des Neugeborenen-Screenings (NBS) ist das frühzeitige Erkennen angeborener Stoffwechselstörungen, bevor diese zu Schäden am Organismus führen. Darunter fallen Störungen des Aminosäurestoffwechsels wie der Phenylketonurie (PKU) und der Ahornsirup-Krankheit (MSUD), Störungen des Fettsäurestoffwechsels sowie Organoazidurien (Isovalerianazidämie). Werden diese Krankheiten nicht diagnostiziert, so können diese Stoffwechselstörungen bereits in den ersten Lebenstagen zu schweren irreversiblen Schäden bei Neugeborenen führen.

Die Massenspektrometrie ist dabei die Methode der Wahl: sie erlaubt die Erfassung eines breiten Spektrums an Stoffwechseldefekten in einem einzigen Lauf. Durch die hohe Selektivität der LC-MS/MS kann auch auf eine HPLC-Säule verzichtet werden. Damit ist eine sehr präzise Quantifizierung in einer sehr kurzen Analysenzeit von unter 2 Minuten möglich.

 

Produktvorteile

  • Einfache SUAC-Bestimmung mit dem Upgrade-Set
  • Screening von vielen Stoffwechselstörungen in einem einzigen Lauf, z.B. Phenylketonurie (PKU), Ahornsirupkrankheit (MSUD) und Tyrosinämie Typ I
  • Je ein eigener interner Standard pro Analyt 

 

Dieser Chromsystems Kit erlaubt eine schnelle und zuverlässige Bestimmung von Aminosäuren, Acylcarnitinen und Succinylaceton aus Trockenblut im Rahmen des Neugeborenen-Screenings von Aminosäure- und Fettsäurestoffwechselstörungen mittels Tandem-Massenspektrometrie. Die Probenvorbereitung basiert auf einer effektiven Extraktion der Analyten aus dem Blood Spot mit anschließender Derivatisierung. Um eine sichere und präzise Quantifizierung der Analyten zu gewährleisten, verwendet die Methode stabile isotopenmarkierte interne Standards für die Kalibrierung und Messung.

Ergänzend steht Ihnen zur Analytik von Succinylaceton ein Upgrade Set zur Verfügung (Best.-Nr. 55111).

Hier geht‘s zur Übersicht aller unserer Assays zum Neugeborenen-Screening.

Technische Daten

Analysenmethode

LC-MS/MS

Anzahl der Bestimmungen

960

Parameter

Acylcarnitine & freies Carnitin, Aminosäuren

Analysendauer

< 2 min

Bestimmungsgrenzen

Aminosäuren mit SUAC: 0,5-5 μmol/l
(Acyl-)Carnitine: 0,05-0,5 μmol/l

Linearität

Aminosäuren mit SUAC: 250-2500 μmol/l
(Acyl-)Carnitine: 11-240 μmol/l

Wiederfindungsrate

Aminosäuren mit SUAC: 51-94 %; (Acyl-)Carnitine: 62-89 %

Intraassay

Aminosäuren mit SUAC: VK = 4-10 %
(Acyl-)Carnitine: VK = 4-20 %

Interassay

Aminosäuren mit SUAC: VK = 5-9 %
(Acyl-)Carnitine: VK = 8-28 %

Cutoff-Werte

Aminosäuren 22-743 µmol/l
freies Carnitin 50-60 µmol/l
Acylcarnitine 0,1-48 µmol/l
SUAC 1,16 µmol/l

Information

Massenübergänge der Analyte und internen Standards

Aminosäuren Neutral Loss Scan 102
Alanin 146 > 44
Alanin-D4 150 > 48
Asparaginsäure 246 > 144
Asparaginsäure-D3 249 > 147
Glutaminsäure 260 > 158
Glutaminsäure-D5 265 > 163
Leucin 188 > 86
Leucin-D3 191 > 89
Methionin 206 > 104
Methionin-D3 209 > 107
Phenylalanin 222 > 120
Phenylalanin-D5 227 > 125
Tyrosin 238 > 136
Tyrosin-D4 242 > 140
Valin 174 > 72
Valin-D8 182 > 80
Aminosäuren und SUAC MRM
Arginin 231>70
Arginin-D7 238 > 77
Citrullin 232 > 113
Citrullin-D2 234 > 115
Glycin 132 > 76
Glycin-13C2-15N 135 > 79
Ornithin 189 > 70
Ornithin-D6 195 > 76
Prolin 172 > 116
Prolin-D7 179 > 123
SUAC 211 > 109
SUAC-13C5 216 > 114
Acylcarnitine und freies Carnitin Parent Ion Scan 85
Carnitin 218 > 85
Carnitin-D9 227 > 85
C2-Carnitin 260 > 85
C2-Carnitin-D3 263 > 85
C3-Carnitin 274 > 85
C3-Carnitin-D3 277 > 85
C4-Carnitin 288 > 85
C4-Carnitin-D3 291 > 85
C5-Carnitin 302 > 85
C5-Carnitin-D9 311 > 85
C5DC-Carnitin 388 > 85
C5DC-Carnitin-D6 394 > 85
C6-Carnitin 316 > 85
C6-Carnitin-D3 319 > 85
C8-Carnitin 344 > 85
C8-Carnitin-D3 347 > 85
C10-Carnitin 372 > 85
C10-Carnitin-D3 375 > 85
C12-Carnitin 400 > 85
C12-Carnitin-D3 403 > 85
C14-Carnitin 428 > 85
C14-Carnitin-D3 431 > 85
C16-Carnitin 456 > 85
C16-Carnitin-D3 459 > 85
C18-Carnitin 484 > 85
C18-Carnitin-D3 487 > 85

Flussrate

20–600 µl/min

Probenmaterial

Trockenblut

Präanalytik

Probenentnahme: Blut aus der Ferse des Neugeborenen direkt auf eine Filterkarte geben. Entnahme zwischen 24. und 72. Lebensstunde, abhängig von der nationalen Richtlinie.

Probenstabilität: Lagerung bei niedriger Feuchtigkeit (< 30 %) und Raumtemperatur ausreichend, wenn die Analyse innerhalb von 24 bis 48 Stunden durchgeführt wird. Für eine längere Lagerung die Proben unter Feuchtigkeitsschutz tiefgefroren unter -18 °C aufbewahren.

Probenvorbereitung

  • 3,2 mm Blood Spot aus den Filterkarten in eine 96-Well-Platte ausstanzen.
  • 200 μl Internal Standard hinzufügen und 20 min schwenken.
  • Überstand in eine neue 96-Well-Platte überführen (oder bei 55000/F 2 min zentrifugieren).
  • Überstand eindampfen.
  • 60 μl Derivatisation Reagent zugeben und 15 min bei 60 °C inkubieren.
  • Überstand eindampfen.
  • 100 μl Reconstitution Buffer zugeben und 1 min schwenken.
  • 10 μl in das LC-MS/MS-System injizieren.

 

In der Probenvorbereitung zur Analytik von Succinylaceton müssen folgende zusätzlichen Schritte vor der Derivatisierung durchgeführt werden: Internal Standard zugeben, 30 min schütteln, Extrakte vereinigen (pipettieren), 20 min inkubieren.

Für mehr Details siehe Arbeitsvorschrift.

Injektionsvolumen

10 µl

Autosampler-Spüllösung

Rinsing Solution (55007)

MS/MS-Modus

Aminosäuren: MRM / Neutral Loss Scan von 102 (m/z); Acylcarnitine: Parent Ion Scan von 85 (m/z)

Zusätzliche Informationen

Es ist keine HPLC-Säule erforderlich.

Hinweis

Bitte beachten Sie, dass die frei zugänglichen Informationen dieser Website, insbesondere auch der Probenvorbereitung, nicht zur Verwendung der Produkte ausreichen. Bitte lesen Sie dazu die Anweisungen und Warnhinweise auf Produkten und/oder in der Arbeitsvorschrift.

Kitkomponenten

Kontrollen