Beschreibung
Klinische Relevanz
Vitamin B1 (Thiamin) spielt eine wichtige Rolle bei der Energiegewinnung aus Kohlenhydraten und Fetten. Die aktive Form ist das Thiaminpyrophosphat (TPP), ein Coenzym für einige enzymatische Reaktionen des Kohlenhydratstoffwechsels sowie für die Pyruvat-Decarboxylase. TPP ist außerdem beim oxidativen Glucoseabbau maßgeblich beteiligt. Die Bestimmung der Konzentration von TPP ist aussagekräftiger als Messungen des Gesamtthiamins, da so ausschließlich die physiologisch wirksame Form berücksichtigt wird.
Vitamin B6 umfasst Pyridoxin, Pyridoxamin und Pyridoxal sowie deren Phosphatderivate. Es wird über die Nahrung aufgenommen und über mehrere enzymatische Umwandlungen in die aktive Form Pyridoxal-5‘-Phosphat (PLP) überführt. PLP ist an nahezu hundert enzymatischen Reaktionen beteiligt, unter anderem als Cofaktor beim Aminosäurestoffwechsel sowie bei der Bildung des roten Blutfarbstoffs und von Neurotransmittern im Gehirn.
Produktvorteile
- Hoher Durchsatz dank Trennung in weniger als 3 min
- Sichere und reproduzierbare Ergebnisse mit spezifischem internen Standard für jeden Parameter
- Einfache Probenvorbereitung mit Pre-mixed Tubes
Der neue UHPLC-Kit ermöglicht die kombinierte Analytik von Vitamin B1 im Vollblut und B6 im Vollblut oder Plasma. Damit erfüllt die Methode dank schnelleren Analysezeiten von weniger als 3 Minuten die Anforderungen für klinische Laboratorien mit höherem Probendurchsatz. Die einfache und effiziente Probenvorbereitung besteht aus einem einzigen Fällungsschritt sowie der anschließenden Derivatisierung im Reaktionsgefäß. Der interne Standard für jeden der beiden Parameter sowie spezielle Qualitätskontrollen gewährleisten eine präzise und sichere Quantifizierung.
Chromsystems bietet alternativ 2 Kits zur Bestimmung mittels HPLC an: eine Standardvariante sowie mit Pre-Mixed Tubes.
Für Laboratorien mit höherem Probendurchsatz gibt es auch eine automatisierte Methode mittels HPLC.
Inhalt
Mobile Phase A, 1000 ml
Mobile Phase B, 1000 ml
Whole Blood Calibration Standard (lyoph.), 5 x 5 x 1 ml
Internal Standard, 10 x 10 ml
Precipitation Reagent, 10 x 30 ml
Pre-mixed Neutralisation Tubes, 10 x 100 Stück
Derivatisation Reagent 1 (lyoph.), 10 x 2 x 0,3 ml
Derivatisation Reagent 2 , 10 x 15 ml
Stabilisation Buffer, 10 x 10 ml
Reaktionsgefäße, bernsteinfarben (Lichtschutz), 10 x 100 Stück
UHPLC-Säule für die Bestimmung von Vitamin B1 im Vollblut und Vitamin B6 im Vollblut/Plasma, 1 Stück
Technische Daten
Analysenmethode
Anzahl der Bestimmungen
Parameter
Analysendauer
Bestimmungsgrenzen
Linearität
Wiederfindungsrate
Intraassay
Interassay
Information
Für die kombinierte Chromsystems UHPLC-Analytik von Vitamin B1/B6 aus Vollblut, Plasma oder Serum ist jedes gängige UHPLC-System mit binärer Pumpe und programmierbarem Fluoreszenzdetektor geeignet.
Probenmaterial
Präanalytik
Probenvorbereitung
- 200 μl Vollblut/Plasma mit 100 μl Internal Standard und 300 μl Precipitation Reagent in einem bersteinfarbenen Reaktionsgefäß zusammengeben.
- 30 s mischen (Vortex).
- 5 min bei 14000 x g zentrifugieren.
- 100 μl Derivatisation Mix in ein beschriftetes Pre-mixed Neutralisation Tube geben und 250 μl des in Schritt 1 bis 3 gewonnnen Überstands zugeben, kurz mischen, den entstehenden Niederschlag nicht abzentrifugieren!
- 25 min bei 60° C inkubieren (Wasserbad).
- Mindestens 10 min bei +2 bis +8 °C abkühlen und danach 2 min bei 14000 x g zentrifugieren.
- Überstand in ein braunes Autosamplergefäß (Lichtschutz) überführen, 2,5–10 μl in das UHPLC-System injizieren.
Probenstabilität
Zusätzliche Informationen
Injektionsvolumen
Flussrate
Gradient
Säulentemperatur
Messwellenlänge
Start mit EX 320 nm, EM 415 nm,
nach ca. 1,6 min auf EX 367 nm, EM 435 nm umschalten
Druck
Hinweis
Kitkomponenten
Kalibratoren
Kontrollen
Produkt-Downloads
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