48000 HPLC kit crosslinks urine

Crosslinks im Urin - HPLC

Best.-Nr.: 48000
100 Tests
  • Deoxypyridinolin (DPD)
  • Pyridinolin (PYD)

Interner Standard, hydrolysestabil
Einfache Probenvorbereitung
Exakte Kalibrierung

Beschreibung

Klinische Relevanz

Pyridinolin (PYD) und Desoxypyridinolin (DPD) entstehen zur strukturellen Stabilisierung als Quervernetzungen („Crosslinks“) bei der Bildung von Kollagenfibrillen. Bei einem pathologischen Knochenabbau erhöhen sich die Konzentrationen von PYD und DPD im Urin, beispielsweise bei der Osteoporose oder bei diversen Knochentumoren. Daher sind PYD und DPD direkte Marker zur Diagnose von postmenopausaler Osteoporose sowie zur Therapiekontrolle nach Medikamenteneinnahme. Bei erfolgreicher Therapie kann bereits innerhalb von wenigen Monaten ein deutlicher Abfall der Crosslinks im Urin festgestellt werden. Weiterhin werden Crosslink-Konzentrationen im Urin auch bei Patienten mit einem Frakturrisiko überprüft, um bei erhöhten Werten bereits im Vorfeld geeignete Maßnahmen zu ergreifen.

 

Produktvorteile

  • Hydrolysestabiler interner Standard
  • Einfache Probenvorbereitung
  • Präzise und zuverlässige Kalibrierung

 

Dieser Kit erlaubt die gleichzeitige Bestimmung von Pyridinolin (PYD) und Desoxypyridinolin (DPD) im Urin mit einfachen isokratischen HPLC-Systemen. Die chromatographische Trennung erfolgt an einer RP-Säule mit nachfolgender Fluoreszenz-Detektion. Durch Verwendung eines hydrolysestabilen internen Standards können Präzision und Zuverlässigkeit der Bestimmung maximiert werden. Mittels Festphasenextraktion werden störende Fluorophore entfernt und anschließend PYD, DPD und interner Standard in einem Lauf eluiert.

Chromatogramm

Technische Daten

Analysenmethode

HPLC

Anzahl der Bestimmungen

100

Parameter

Deoxypyridinolin (DPD), Pyridinolin (PYD)

Analysendauer

< 15 Minuten

Bestimmungsgrenzen

Pyridinolin: 15 pmol/ml
Deoxypyridinolin: 15 pmol/ml

Linearität

Pyridinolin: bis zu 3200 pmol/ml
Deoxypyridinolin: bis zu 1200 pmol/ml

Wiederfindungsrate

Pyridinolin: 95,5 % (Vk: 1,4 %); Deoxypyridinolin: 93,6 % (Vk: 2,0 %)

Intraassay

Pyridinolin: Vk 3,8 %
Deoxypyridinolin: Vk 5,9 %

Interassay

Pyridinolin: Vk 5,1 %
Deoxypyridinolin: Vk 8,9 %

Gradient

Isokratisch

Säulentemperatur

Raumtemperatur (~25 °C)

Flussrate

1,2 ml/min

Probenmaterial

Urin

Probenvorbereitung

  • 250 µl Urin, 50 µl Internal Standard und 250 µl konz. HCl zusammengeben und bei 100°C ca. 12-16 Stunden (über Nacht) hydrolysieren.

  • Je 2,5 ml Extraction Buffer zugeben, mischen.

  • Die SPE-Säulchen mit 2,0 ml Wash Buffer konditionieren.

  • Das gesamte Probenvolumen auf diese Säulchen geben und mit ca. 170 x g vollständig durchzentrifugieren. Den Durchlauf verwerfen.

  • Auf jede Säule 2,5 ml Wash Buffer geben, bei ca. 700 x g durchzentrifugieren. Durchlauf verwerfen. Diesen Schritt zweimal wiederholen.

  • Auffangröhrchen wechseln

  • Anschließend 1,0 ml Elution Buffer auf jede Säule geben und bei ca. 700 x g vollständig durchzentrifugieren. Das Eluat gründlich mischen.

  • 50 µl des Eluates injizieren.

Probenstabilität

Bei +2 bis +8 °C bis zu 7 Tagen. Ist der Zeitraum bis zur Analyse länger als 1 Woche Proben einfrieren. Vor Licht schützen.

Injektionsvolumen

50 µl

Fluss

1,2 ml/min

Zusätzliche Informationen

Für die HPLC-Analytik der Crosslinks im Urin ist jedes gängige isokratische HPLC-System mit Fluoreszenz-Detektor geeignet.

Messwellenlänge

EX 290 nm
EM 395 nm

Hinweis

Bitte beachten Sie, dass die frei zugänglichen Informationen dieser Website, insbesondere auch der Probenvorbereitung, nicht zur Verwendung der Produkte ausreichen. Bitte lesen Sie dazu die Anweisungen und Warnhinweise auf Produkten und/oder in der Arbeitsvorschrift.

Kitkomponenten

Einzeln lieferbare Komponenten

Mobile Phase


Best.-Nr.: 48001

Internal Standard


Best.-Nr.: 48004

Extraction Buffer


Best.-Nr.: 48005

Wash Buffer


Best.-Nr.: 48006

Elution Buffer


Best.-Nr.: 48007

Sample Clean Up Columns


Best.-Nr.: 48008

Kalibratoren

Einzeln lieferbare Kalibratoren

Kontrollen

Einzeln lieferbare Kontrollen